Proxecto Paragone H2020: PARAGONE: Vacinas contra parasitos animais

A investigación levou ao desenvolvemento das vacinas e ferramentas inmunolóxicas mencionadas anteriormente. Estas actividades foron apoiadas por obxectivos demostrativos liderados por socios comerciais. Os socios académicos cumpriron coa súa obriga de publicar os seus resultados e actualizaron a páxina web do proxecto. Os científicos de inicio de carreira tiveron a oportunidade de participar en visitas e obradoiros interlaboratorios (Secuenciación de Próxima Xeración, Ferramentas Inmunolóxicas, Vacunoloxía Veterinaria). Numerosas actividades de divulgación aseguraron que o proxecto alcanzase o seu potencial de impacto; Simposios presenciais das partes interesadas e unha enquisa internacional en liña revelaron as perspectivas futuras das vacinas antiparasitarias.

As vacinas comezaron en varias etapas ao longo do camiño de desenvolvemento; De máis avanzadas a menos avanzadas, estas foron as vacinas contra T. circumcincta, O. ostertagi, C. oncophora, F. hepatica, P. ovis e o ácaro vermello das aves. Vinculados aos ensaios que probaron combinacións de antíxenos estiveron estudos sobre formulacións de vacinas deseñadas para promover respostas protectoras. Este traballo estivo vinculado á definición de respostas antiparasitarias protectoras para que as vacinas puidesen ser deseñadas para ser eficaces en todas as poboacións. Para O. ostertagi e C. oncophora, estudos e ensaios inmunolóxicos demostraron que a conformación do antíxeno é fundamental para inducir a protección mediante antíxenos ASP. Demostrouse que un ASP nativo de C. oncophora protexe cruzadamente o gando contra outro illado e outras Cooperia spp. pero non protexeu ás ovellas contra C. curticei. Formulación dun Ostertagia ASP recombinante coa nova formulación de adyuvante SME XStalbio con respostas moduladas por MAMP a un fenotipo desexado, pero non induciu protección. Un ensaio de campo con ASP nativo de Ostertagia, que induciu a inmunidade nos ensaios con pluma, non xerou protección contra o desafío da herba. Un estudo probou un ASP recombinante, purificado con tiol do mesmo xeito que o ASP nativo protector, pero isto non produciu unha vacina protectora.

O traballo en T. circumcincta tiña como obxectivo simplificar unha vacina recombinante que se demostrou que induce protección. Aquí, 8 antíxenos coexpresaron con éxito en 3 sistemas. A versión coexpresada non induciu inmunidade nos cordeiros. Probouse a formulación adxuvante de XStalbio con MAMP para examinar se as respostas poderían mellorarse coa administración concomitante. A incorporación mantivo a antixenicidade pero non mellorou as respostas desexadas. Os ensaios en corral de razas canarias que mostraron diferentes resistencias aos vermes demostraron que en ovellas "resistentes" de 6 meses, a resistencia aumentou coa vacinación. Nos cordeiros "susceptibles", a vacinación tivo un efecto negativo no desenvolvemento dos vermes. Un efecto similar observouse en ovellas "resistentes" de 3 meses. As secuencias codificantes de antíxenos en vermes de diferentes rexións mostraron baixa diversidade en 7/8 proteínas. Un prototipo de 2 proteínas inducía unha protección similar ao rango do prototipo de 8 proteínas.

Esta vacina de 2 proteínas foi probada de novo nun estudo que analizou o efecto da dose; Aínda que os individuos vacinados tiñan parámetros parasitolóxicos máis baixos que os controis, as diferenzas non foron significativas. O modelado matemático, utilizando datos previos sobre a vacina de 8 proteínas, mostrou que os niveis de eficacia alcanzados anteriormente poderían ter un efecto substancial na contaminación posterior se a vacina se administraba a ovellas e cordeiros. Anteriormente demostrouse que os antíxenos recombinantes de F. hepatica proporcionan protección variable; Os socios probaron estas combinacións para examinar se isto xeraría unha protección consistente. Observouse unha protección significativa nun ensaio de ovellas usando 4 antíxenos + montanida; Isto non era repetible. Dous ensaios en gando vacún que usaban os 4 antíxenos non tiveron éxito. As secuencias de antíxenos en vermes de diferentes rexións mostraron baixa diversidade en todos menos nunha. Probouse a incorporación de MAMPs na formulación do adyuvante de XStalbio para examinar se as respostas poderían mellorarse mediante a coadministración. A antixenicidade mantívose, especialmente con MAMP. As respostas eran dependentes dos adxuvantes, pero non se obtivo protección cando se desafiaron ás ovellas. Probáronse antíxenos adicionais, pero estes non proporcionaron protección nas ovellas.

O traballo sobre correlatos de protección mostrou un papel para a IgG2. A análise dos epítopos indicou o recoñecemento selectivo da catepsina L no gando protexido. A análise de ARN a gran escala revelou que as vías de evasión inmunitaria foron significativamente alteradas na infección por fluke, e un ensaio en corral de ovellas mostrou a inmunomodulación nas primeiras fases da infección. Estes resultados da inmunomodulación agora utilizaranse para informar sobre o desenvolvemento da vacina contra F. hepatica. O traballo nun prototipo bovino para P. ovis incluíu un ensaio con recombinantes que previamente protexían ovellas. Aínda que inicialmente se observaron diferenzas no tamaño da lesión, non se observaron diferenzas significativas en xeral.

Os estudos de ARN informaban sobre os mecanismos inmunes. Comparáronse os sistemas de administración de antíxenos (montánida, ADN e Eimeria transxénica) para unha vacina de catepsina contra o ácaro vermello aviar. O ADN e Eimeria mostraron respostas de anticorpos insignificantes, pero a combinación antíxeno+montanido produciu respostas prolongadas. As galiñas foron vacinadas con catepsina+montanida e observouse un efecto nos ácaros que se alimentaban do sangue das aves vacinadas. PARAGONE xerou matrices de citocinas ovinas moi necesarias. Xunto cos perfís dos produtos obxectivo e as revisións técnicas de cada vacina, desenvolveuse un plan de comercialización destas ferramentas en colaboración coa SME Immunotools.