Proxecto Paragone H2020: PARAGONE: Vacinas contra parasitos animais

A investigación levou ao desenvolvemento das vacinas e ferramentas inmunolóxicas mencionadas anteriormente. Estas actividades contaron co apoio de obxectivos de demostración liderados por socios comerciais. Os socios académicos cumpriron coa súa obriga de publicar os seus achados e actualizaron o sitio web do proxecto. Os científicos que estaban a comezar a súa carreira tiveron a oportunidade de participar en visitas e obradoiros interlaboratorios (secuenciación de nova xeración, ferramentas inmunolóxicas, vacinoloxía veterinaria). Numerosas actividades de divulgación aseguraron que o proxecto acadase o seu potencial de impacto; Simposios presenciais con partes interesadas e unha enquisa internacional en liña revelaron as perspectivas de futuro das vacinas antiparasitarias.

As vacinas comezaron en varias etapas do proceso de desenvolvemento; De máis avanzada a menos avanzada, estas foron vacinas contra *T. circumcincta*, *O. ostertagi*, *C. oncophora*, *F. hepatica*, *P. ovis* e o ácaro vermello das aves de curral. Vinculados aos ensaios que probaban combinacións de antíxenos, realizáronse estudos sobre formulacións de vacinas deseñadas para promover respostas protectoras. Este traballo estivo ligado á definición de respostas antiparasitarias protectoras para que as vacinas puidesen deseñarse para que fosen eficaces en todas as poboacións. Para O. ostertagi e C. oncophora, os estudos e ensaios inmunolóxicos demostraron que a conformación do antíxeno é clave para inducir a protección usando antíxenos ASP. Demostrouse que unha ASP nativa de C. oncophora protexe de forma cruzada o gando contra outro illamento e outras Cooperia spp. pero non protexía as ovellas contra C. curticei. A formulación dun ASP recombinante de Ostertagia coa nova formulación adxuvante SME XStalbio con MAMP modulou as respostas a un fenotipo desexado, pero non induciu protección. Un ensaio de campo con ASP autóctona de Ostertagia, que inducira inmunidade en ensaios de corral, non xerou protección contra a infección pola herba. Un estudo probou unha ASP recombinante, purificada con tiol do mesmo xeito que a ASP nativa protectora, pero non produciu unha vacina protectora.

O traballo en *T. circumcincta* tiña como obxectivo simplificar unha vacina recombinante que demostrou inducir protección. Aquí, 8 antíxenos foron coexpresados con éxito en 3 sistemas. A versión coexpresada non induciu inmunidade en cordeiros. A formulación adxuvante de XStalbio con MAMP foi probada para examinar se as respostas podían mellorar mediante a coadministración. A incorporación conservou a antixenicidade pero non mellorou as respostas desexadas. As probas en corrales en razas canarias que mostraron diferente resistencia aos vermes mostraron que en ovellas "resistentes" de 6 meses de idade, a resistencia aumentou coa vacinación. En cordeiros "susceptibles", a vacinación tivo un efecto negativo no desenvolvemento de vermes. Observouse un efecto similar en ovellas "resistentes" de 3 meses de idade. As secuencias codificantes de antíxenos en vermes de diferentes rexións mostraron baixa diversidade en 7/8 proteínas. Un prototipo de 2 proteínas induciu unha protección similar ao rango do prototipo de 8 proteínas.

Esta vacina de 2 proteínas foi probada de novo nun estudo que analizou o efecto da dose; Aínda que os individuos vacinados presentaban parámetros parasitolóxicos máis baixos que os controis, as diferenzas non foron significativas. A modelización matemática, empregando datos previos sobre a vacina de 8 proteínas, mostrou que os niveis de eficacia acadados previamente poderían ter un efecto substancial na contaminación posterior se a vacina se administraba a ovellas e cordeiros. Demostrouse previamente que os antíxenos recombinantes de F. hepatica proporcionan unha protección variable; Os socios probaron estas combinacións para examinar se isto xeraría unha protección consistente. Observouse unha protección significativa nun ensaio con ovellas empregando 4 antíxenos + montanida; Isto non era repetible. Dous ensaios en gando vacún cos 4 antíxenos resultaron infrutuosos. As secuencias de antíxenos en vermes de diferentes rexións mostraron baixa diversidade en todas agás nunha. Probouse a incorporación de MAMP na formulación adxuvante de XStalbio para examinar se as respostas poderían mellorar mediante a coadministración. A antixenicidade mantívose, especialmente con MAMP. As respostas foron dependentes do adxuvante, pero non se obtivo protección cando se expuxo ás ovellas. Probáronse antíxenos adicionais, pero estes non proporcionaron protección nas ovellas.

O traballo sobre correlatos de protección mostrou un papel para a IgG2. A análise de epítopos indicou un recoñecemento selectivo da catepsina L en gando protexido. A análise de ARN a grande escala revelou que as vías de evasión inmunitaria estaban significativamente alteradas na infección por trematodes, e un ensaio en cortellos de ovellas mostrou inmunomodulación nas primeiras etapas da infección. Estes resultados da inmunomodulación empregaranse agora para fundamentar o desenvolvemento da vacina contra F. hepatica. O traballo nun prototipo bovino de P. ovis incluíu un ensaio con recombinantes que anteriormente protexían as ovellas. Aínda que inicialmente se observaron diferenzas no tamaño das lesións, en xeral non se observaron diferenzas significativas.

Os estudos de ARN informaron os mecanismos inmunitarios. Comparáronse os sistemas de administración de antíxenos (montánidos, ADN e Eimeria transxénica) para unha vacina de catepsina contra o ácaro vermello aviario. O ADN e a Eimeria mostraron respostas de anticorpos insignificantes, pero a combinación antíxeno+montanida produciu respostas prolongadas. As galiñas foron vacinadas con catepsina+montanida e observouse un efecto nos ácaros que se alimentaban do sangue das aves vacinadas. PARAGONE xerou as moi necesarias matrices de citocinas ovinas. Xunto cos perfís dos produtos obxectivo e as revisións técnicas de cada vacina, desenvolveuse un plan de comercialización para estas ferramentas en colaboración coa peme Immunotools.